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- CST抗體的純化
- 點(diǎn)擊次數(shù)：3046 更新時(shí)間：2018-05-28
- CST抗體的純化CST抗體對(duì)于血清、腹水和組織培養(yǎng)上清的澄清，離心和過(guò)濾是基本的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，這些技術(shù)可以去除會(huì)阻塞層析柱的脂類和小顆粒物質(zhì)。對(duì)于某些樣品，緩沖液置換和除鹽也是必要的步驟。硫酸銨沉淀作為更進(jìn)一步的預(yù)處理步驟，經(jīng)常用于濃縮腹水中的免疫球蛋白。抗血清CST抗體有時(shí)是不經(jīng)純化的，稱為血清或抗血清?？寡迨侵敢呀?jīng)除去了凝血蛋白和血紅細(xì)胞的免疫宿主的血液。抗血清包含所有種類的抗體/免疫球蛋白以及其它血清蛋白。它所包含的不僅有識(shí)別靶抗原的抗體，還有識(shí)別非靶抗原的抗體，在免疫分析中有時(shí)會(huì)發(fā)生非特異性反應(yīng)。由于這個(gè)原因，粗制抗血清通常要進(jìn)行純化，以去除血清蛋白，增加能特異和靶抗原相結(jié)合的免疫球蛋白的比例。組織培養(yǎng)上清單克隆抗體可以通過(guò)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)（細(xì)胞分泌性抗體）并收獲雜交瘤組織培養(yǎng)上清來(lái)獲得。腹水CST抗體可以通過(guò)在小鼠的腹腔中生長(zhǎng)雜交瘤細(xì)胞而產(chǎn)生。雜交瘤細(xì)胞注射入小鼠以后，就會(huì)在小鼠腹腔繁殖并產(chǎn)生液體（腹水）。這種腹水就包含了高濃度的可收獲抗體，比雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)有更高的抗體產(chǎn)量。抗體純化多克隆抗血清或單克隆腹水/組織培養(yǎng)上清通常通過(guò)下述三種方法中的一種來(lái)進(jìn)行純化：蛋白A/G 純化蛋白A/G 純化是應(yīng)用金黃色葡萄球菌的蛋白A 或鏈球菌的蛋白G 對(duì)免疫球蛋白Fc 段的高親和性。蛋白A/G 純化從粗制抗血清中去除了血清蛋白，但沒(méi)有去除非特異的免疫球蛋白組分。CST抗體結(jié)果蛋白A/G 純化的抗血清仍然具有一小部分不期待的交叉反應(yīng)性。親和純化親和純化是通過(guò)相似性分離某一特定蛋白或具有相似特征的一組蛋白。這種分離蛋白的技術(shù)是基于在蛋白和耦合于層析介質(zhì)上的特定配基之間的一種可逆的相互作用。抗原親和純化是利用免疫球蛋白能夠特異性地同刺激它產(chǎn)生的抗原進(jìn)行結(jié)合的特點(diǎn)，消除了大量的非特異免疫球蛋白成分，把與目標(biāo)抗原特異結(jié)合的免疫求蛋白富集。因此親和純化后獲得的主要是含目標(biāo)特異性免疫球蛋白。前吸收CST抗體有時(shí)要經(jīng)過(guò)前吸收。也就是說(shuō)它們要被不同物種來(lái)源的其它蛋白或血清吸收，以消除可能的交叉反應(yīng)的抗體。這樣純化后的抗體純度和特異性都很高，任何交叉反應(yīng)都被顯著減少。
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