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- 改善后的組織細(xì)胞固定液具有的可溶性有以下幾點(diǎn)
- 點(diǎn)擊次數(shù)：2739 更新時(shí)間：2019-03-28
- 組織細(xì)胞固定液是目的在于保存細(xì)胞和組織的原有形態(tài)結(jié)構(gòu)，固定劑能阻止內(nèi)源性溶酶體酶對(duì)自身組織和細(xì)胞的自溶、抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)。固定液分為醛類(lèi)固定液、汞類(lèi)固定液、醇類(lèi)固定液、氧化劑類(lèi)固定液、苦味酸鹽類(lèi)固定液等，較為常用的是醛類(lèi)中的福爾馬林、醇類(lèi)中的乙醇。
多聚甲醛溶液(1% PFA)主要由多聚甲醛、磷酸鹽、去離子水組成，該固定液適合于絕大多數(shù)組織和細(xì)胞的固定，是免疫組織化學(xué)和培養(yǎng)細(xì)胞的固定液之一，它能較好的保護(hù)組織和細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)以及核酸。
組織細(xì)胞固定液的改善可溶性：
1、改變N端或C端：酸性肽(pH值為7時(shí)帶負(fù)電荷)我們提議；N端乙酰化C端保持自由羧基，以增加負(fù)電荷。堿性肽(pH值為7時(shí)帶正電荷)C端氨基化N段自由氨基，以增加正電荷。
2、縮短或加長(zhǎng)序列：某些序列含有大量疏水氨基酸，如Trp、Phe、Val、Ile、Leu、Met、Tyr、Ala等當(dāng)這些疏水殘基大于50%通常難溶解。為增加肽的極性，加長(zhǎng)序列可能會(huì)有幫助。另外一種選擇是通過(guò)減少疏水殘基的方法降低肽鏈的長(zhǎng)度以增加極性。肽鏈極性越高，就越有可能溶于水。
3、加入可溶性殘基：對(duì)于一些極性氨基酸能改善可溶性。酸性肽可在N端或C端加上Glu-Glu.堿性肽可在N端或 C端加上Lys-Lys.若不能加入帶電荷集團(tuán)。可以將Ser-Gly-Zer加到N端或C端。但是，當(dāng)肽鏈的兩端不能改變時(shí)，此方法不行。
4、通過(guò)置換一個(gè)或多個(gè)殘基改變序列：肽鏈的可溶性可通過(guò)改變序列某些殘基來(lái)改善，一般對(duì)單個(gè)殘基的替換就能顯著改變其疏水性。而這種改變是較為保守的，如用Gly替換Ala。
5、選用不同“框架”來(lái)改變序列。
組織細(xì)胞固定液的樣品要求：
1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分，如有特殊成分，請(qǐng)?zhí)崆皹?biāo)注說(shuō)明。
2、待標(biāo)記樣品蕞小標(biāo)記量為1mg，是干粉，如果是液體，濃度應(yīng)大于1mg/ml。
3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉、甘氨酸等成分。
4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點(diǎn)、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。
5、請(qǐng)?zhí)崆罢f(shuō)明任何特殊情況。 - 上一篇：胎牛血清10099141在日常使用中有哪些作用？
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